Ovation人類FFPE RNA-Seq多重文庫構(gòu)建試劑盒使用從人類組織或細(xì)胞系獲得的納克級總RNA,為鏈特異性RNA-Seq文庫構(gòu)建提供了端到端的解決方案。該工作流程同樣適用于新鮮冷凍樣品(低至10 ng)的總RNA或FFPE樣品(低至100 ng)的保存RNA。從總RNA輸入到完整構(gòu)建的文庫的整合工作流程具有很高的可重復(fù)性,可以在大約7小時內(nèi)完成。 NuGEN的依賴插入的AnyDeplete技術(shù)可有針對性地消除不需要的轉(zhuǎn)錄本,并顯著減少了源自人類rRNA(12S,16S,18S和28S基因)的測序數(shù)據(jù),從而更有效地利用了測序通量。該試劑盒均提供八個*的條形碼接頭,以使多重測序能夠進一步優(yōu)化功效。
簡化的工作流程包括使用隨機和多聚(T)引物的混合物反轉(zhuǎn)錄生成雙鏈cDNA,雙鏈cDNA打斷,末端修復(fù)以生成平末端,接頭進行連接,通過核苷酸類似物靶向降解的鏈選擇,AnyDeplete技術(shù)介導(dǎo)的接頭裂解和PCR擴增以產(chǎn)生終文庫。 整個工作流程,包括片段化,都可在短短7個小時內(nèi)完成,并生成可用于在Illumina測序平臺上進行單端或雙端測序的簇形成的DNA文庫。
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